Pewarnaan Mieloperoksidase Memperkuat Diagnosis Penyakit Darah

Pewarnaan Mieloperoksidase (MPO), juga dikenal sebagai pewarnaan peroksidase leukosit (POX), adalah metode pewarnaan sitokimia yang banyak digunakan. Terutama digunakan untuk mewarnai sel sumsum tulang dan apusan darah, teknik ini mendeteksi aktivitas peroksidase intraseluler untuk membantu dalam mendiagnosis gangguan hematologi, khususnya dalam klasifikasi leukemia.

Pewarnaan MPO bergantung pada reaksi katalitik peroksidase intraseluler. Enzim ini memecah oksida untuk menghasilkan oksigen, yang kemudian bereaksi dengan kalium iodida untuk membentuk yodium. Yodium bergabung dengan pewarna Wright-Giemsa, menciptakan butiran berwarna di sitoplasma yang mengungkapkan distribusi peroksidase di bawah mikroskop. Berbagai jenis sel menunjukkan kandungan dan pola distribusi peroksidase yang bervariasi, yang memungkinkan pewarnaan MPO untuk membedakan di antara mereka.

Pewarnaan MPO standar memerlukan kit reagen khusus untuk memastikan keakuratan dan keandalan. Kit tipikal berisi:

• Larutan A: Larutan eosin - Pewarna asam yang mewarnai sitoplasma merah atau merah muda
• Larutan B: Azure II - Pewarna basa yang mewarnai inti biru atau ungu
• Larutan C: Buffer PBS kalium iodida - Berisi substrat reaksi peroksidase dan mempertahankan stabilitas pH
• Larutan D: Pewarna Wright-Giemsa - Pewarna serbaguna yang meningkatkan morfologi seluler

Kit tersedia dalam berbagai ukuran (konfigurasi 5-tes, 20-tes, dan 100-tes) untuk mengakomodasi kebutuhan laboratorium yang berbeda.

1. Persiapan larutan kerja: Campurkan Larutan C dengan Larutan D (biasanya rasio 1,0ml:250µl). Gunakan dalam waktu dua jam.
2. Fiksasi apusan: Fiksasi apusan sumsum tulang atau darah yang disiapkan dengan metanol atau etanol selama 5-10 menit.
3. Pewarnaan: Rendam apusan yang telah difiksasi dalam larutan kerja selama 5-10 menit, mengontrol suhu dan kelembaban.
4. Pembilasan: Cuci perlahan dengan air suling atau buffer PBS untuk menghilangkan kelebihan pewarna.
5. Pewarnaan balik (opsional): Gunakan hematoksilin untuk meningkatkan kontras nuklir.
6. Pengeringan: Keringkan di udara atau gunakan pengering rambut.
7. Mikroskopi: Periksa apusan yang diwarnai untuk mengevaluasi aktivitas dan distribusi peroksidase.

Interpretasi hasil memerlukan keahlian khusus. Temuan umum meliputi:

• Reaksi positif: Butiran sitoplasma merah-coklat hingga biru tua (positivitas lemah vs. kuat). Butiran dapat menutupi seluruh sitoplasma atau mengaburkan inti.
• Reaksi negatif: Sitoplasma biru tanpa butiran dan inti merah-ungu seragam.
• Eosinofil: Menunjukkan pewarnaan biru tua yang intens, terkadang dengan kristal seperti jarum ekstraseluler.

• Klasifikasi leukemia: Membedakan leukemia myeloid (MPO-positif) dari limfoid (MPO-negatif), memandu keputusan pengobatan.
• Diagnosis leukemia myeloid akut (AML): Mengkonfirmasi asal myeloid dan membantu subtipe, dengan tingkat positivitas yang bervariasi yang menunjukkan subtipe AML yang berbeda.
• Evaluasi sindrom myelodysplastic (MDS): Menilai pematangan dan diferensiasi seluler, dengan pola MPO abnormal yang menunjukkan MDS.
• Gangguan hematologi lainnya: Berguna dalam mendiagnosis leukemia myeloid kronis dan myelofibrosis.

• Kualitas reagen dan kondisi penyimpanan
• Kepatuhan protokol yang ketat
• Persiapan apusan yang tepat
• Durasi pewarnaan yang optimal
• Evaluasi mikroskopis ahli oleh ahli patologi

Kemajuan teknologi terus meningkatkan pewarnaan MPO. Imunohistokimia sekarang menggabungkan MPO dengan penanda kekebalan untuk presisi yang lebih besar, sementara sitometri aliran memungkinkan deteksi MPO kuantitatif. Saat metode sitokimia klasik ini berkembang, ia berjanji untuk memberikan kontribusi yang lebih besar untuk diagnosis dan pengobatan hematologi.